A08.30.038 Определение индекса пролиферативной активности экспрессии Ki-67 иммуногистохимическим методом (Жидкостная цитология шейки матки и иммуноцитохимическое определение онкомаркеров p16ink4a и ki67)

Жидкостная цитология шейки матки является новой стандартизированной технологией приготовления цитологического препарата. На сегодняшний день данный метод является самым информативным в диагностике интраэпителиальных неоплазий. Благодаря новой технологии количество ложных результатов значительно ниже, чем при использовании классических методов цитологического исследования мазка. Это достигается использованием специального стабилизирующего раствора и инструментов для взятия мазка – щеточки cervex-brush.

Жидкостная цитология шейки матки в современной медицине является очень важным исследованием. В настоящее время рак шейки матки занимает вторую позицию по распространенности рака среди женщин и согласно ВОЗ смертность от данной патологии быстро увеличивается.

Для того, чтобы рак шейки матки развился требуется длительное время. От появления интраэпителиальных поражений низкой и высокой степени до возникновения инвазивного рака должно пройти не менее 10 лет. Из этого можно сделать вывод, что у женщины достаточно времени, чтобы диагностировать начальные изменения и начать профилактику. Чаще в клиниках используются классические цитологические исследования мазка – окрашивание биоматериала по Папаниколау и Рар-тест. Эти цитологические методы часто дают ложноотрицательные результаты – до 40 процентов. Это обусловлено неадекватно приготовленным препаратом, нарушениями процедур взятия материала. При использовании жидкостной цитологии шейки матки частота ошибок значительно уменьшается.

Преимущества жидкостной цитологии шейки матки:

• Отличное качество материала для анализа на цитологию
• Длительное хранение биоматериала в специальном растворе, что дает возможность его хранить или транспортировать (без разрушения и потери клеток).
• Приготовление препарата происходит быстро
• Из одного материал можно приготовить несколько препаратов для анализа на цитологию
• Методики окрашивания препарата стандартизированы

Таким образом, жидкостной цитологии шейки матки качество цитологического исследования мазка значительно повышается.

Анализ на цитологическое исследование мазка рекомендуется сдавать в качестве скрининга, даже когда симптомов нет. Сдать анализ на цитологию в первый раз следует через 3 года после начала половой жизни, либо при достижении 21 года. Скрининг необходимо проходить ежегодно. Если после 30 лет у женщины три последовательных отрицательных результата анализа на цитологию, то скрининг можно проходить раз в два-три года, но при наличии факторов риска (иммунодефицит, инфицирование ВПЧ) у женщины, ей необходимо анализ на цитологию ежегодно. Также скрининг следует проводить женщинам, у которых была удалена матка, но сохранена шейка матки. Ранняя диагностика при помощи жидкостной цитологии шейки матки позволяет вовремя выявить патологию и предотвратить развитие злокачественной опухоли, путем своевременного адекватного лечения.

Доказано, что ВПЧ (вирус папилломы человека) является фактором, который индуцирует развитие рака шейки матки. Значительно повышает эффективность скрининга определение клеточного протеин p16INK4a. Его экспрессия увеличивается при репликации онкобелков E6 и E7, которые реплицируются при интеграции вируса папилломы человека в генетический материал клеток эпителия шейки матки. В норме данный белок вырабатывает в очень малых количествах, которые нельзя обнаружить. При развитии канцерогенеза эпителия шейки матки это протеин синтезируются в больших количествах и дает возможность оценить дисплазию. Выявление p16INK4a является отличным дополнением к жидкостной цитологии шейки матки, так как совместное их применение позволяет выявить патологию на ранних стадиях развития (особенно CIN II, CIN III и начальные формы рака). Выявление заболевания на данных стадиях развития позволяет излечить пациентку практически в 100%.

Еще одним онкомаркером является антиген KI-67 – он также используется в рутинных исследованиях. Этот ядерный антиген позволяет выявить опухолевые клетки, находящиеся в активной фазе клеточного цикла, на всем его протяжении. KI-67 позволяет определять опухолевую активность клеток, что существенно влияет на тактику дальнейшего ведения и лечения пациентов.

Сдать анализ на цитологию при профилактическом скрининге следует после пятого дня менструального цикла, а также спустя двое суток после полового контакта. Не рекомендуется проводить жидкостную цитологию шейки матки на фоне применение вагинальных лекарственных препаратов, лубрикантов, спермицидов, применения спринцеваний влагалища, а также во время месячных или при наличии генитальной инфекции.

Вышеперечисленные факторы не должны учитывать, если на шейке матки патология обнаруживается визуально.

Сдать анализ на цитологию следует для профилактического скрининга, данное исследование рекомендуется женщинам в возрасте от 21 до 65 лет.

1. Оценка адекватности образца:

• Адекватный (при этом описывается клеточный состав)
• Недостаточно адекватный (образец недостаточно адекватный по количественному и качественному составу, указывается причина (при этом описывается клеточный состав)
• Неудовлетворительный образец для оценки (клеточного состава недостаточно для уверенного заключения)

2. Цитологическое описание

Описывает клеточный состав, клетки эпителия, отдельно описывается зона трансформации (метаплазия эпителия, цилиндрический эпителий). При наличии описываются интраэпителиальные изменения, которые также указываются в пункте №4.

3. Доброкачественные изменения:

• Дегенеративные
• Репаративные
• Дискератоз, гиперкератоз, паракератоз
• Бактериальный вагиноз
• Увеличения ядер плоского, метаплазированного эпителия
• Лучевые изменения

При отсутствии доброкачественных изменений отмечается, что они не обнаружены.

4. Патологические изменения в цитологическом исследовании мазка, согласно классификации, Bethesda:

• ASC-US атипия плоского эпителия неясного значения;
• ASC-H атипия плоского эпителия, не исключающая HSIL;
• LSIL плоскоклеточное интраэпителиальное поражение низкой степени;
• HSIL плоскоклеточное интраэпителиальное поражение высокой степени;
• CIS карцинома in situ;
• AG-US атипия железистого эпителия неясного значения;
• AIS- эндоцервикальная карцинома in situ.

При отсутствии патологических изменений отмечается, что они не обнаружены.

5. Доп. уточнения.

Данный пункт может содержать информацию об обнаруженных грибках рода Кандида, бактериях, трихомонаде вагиналис и другой флоре.

Тест на p16INK4a оценивается совместно с жидкостной цитологией шейки матки. Положительный результат анализа на белок p16INK4a означает, что без соответствующего лечения данное состояние приведет к раку шейки матки.

Также, дается описательный ответ с указанием индекса пролиферативной активности (процент клеток, в которых определяется экспрессия антител к KI-67).